Hvad sker der, hvis du tilføjer for meget restriktionsenzym?
Hvad sker der, hvis du tilføjer for meget restriktionsenzym?

Video: Hvad sker der, hvis du tilføjer for meget restriktionsenzym?

Video: Hvad sker der, hvis du tilføjer for meget restriktionsenzym?
Video: AP Biology: Restriction Enzyme Digests on Circular Plasmids 2024, November
Anonim

Ufuldstændig fordøjelse kan forekomme når for meget eller også lille enzym anvendes. Det tilstedeværelse af forurenende stoffer i det DNA-prøve kan inhibere enzymerne , hvilket også resulterer i ufuldstændig fordøjelse. Nogle restriktionsenzymer kræver cofaktorer for fuld aktivitet.

Desuden, hvorfor tilsættes restriktionsenzymer sidst?

Det restriktionsenzym er normalt sidst komponent tilføjet til en reaktion for at sikre, at den ikke udsættes for ekstreme forhold. Den samlede reaktion skal blandes efter enzym tilføjelse. Bland alle opløsninger indeholdende restriktionsenzymer forsigtigt at undgå enzym inaktivering.

Desuden, hvordan kan restriktionsenzymfordøjelsen forbedres? Brug ikke mere end det anbefalede enzym mængde (f.eks. 10 enheder af enzym mikrogram DNA). Reducer mængden af enzym i reaktionen evt. Undgå langvarig inkubation af fordøjelse reaktion. Brug den anbefalede reaktionsbuffer.

Ved også, hvorfor ville et restriktionsenzym ikke skære?

Fremstilling af DNA, der skal spaltes bør være fri for forurenende stoffer som phenol, chloroform, alkohol, EDTA, rengøringsmidler eller overskydende salte, som alle kan forstyrre restriktionsenzym aktivitet. Hvis en inhibitor (ofte salt, EDTA eller phenol) er til stede, vil kontrol-DNA'et ikke skåret efter blanding.

Hvorfor kan mængden af enzym forårsage stjerneaktivitet?

Stjerneaktivitet er lempelse eller ændring af begrænsningens specificitet enzym medieret spaltning af DNA, der kan forekomme under reaktionsbetingelser, der adskiller sig væsentligt fra dem, der er optimale for enzym . Stjerneaktivitet kan ske på grund af tilstedeværelsen af Mg2+, som er ses for eksempel i HindIII.

Anbefalede: