Hvad er formålet med at bruge ddNTP'er?
Hvad er formålet med at bruge ddNTP'er?

Video: Hvad er formålet med at bruge ddNTP'er?

Video: Hvad er formålet med at bruge ddNTP'er?
Video: Infinitives of Purpose | English Grammar Lesson 2024, November
Anonim

DdNTP refererer til Dideoxynukleotider triphosphater, som bruges i Sanger dideoxy-metoden til at producere forskellige længder af DNA-strenge til DNA-sekventering. Dette resulterer i afbrydelsen af DNA-polymerisation (eller DNA-forlængelse), fordi denne proces kræver en 3'-OH-gruppe for at fortsætte.

Derfor, hvorfor bruges ddNTP'er i sekventering?

Dideoxynukleotider er kædeforlængende hæmmere af DNA-polymerase, Brugt i Sanger-metoden til DNA sekventering . Dideoxyribonukleotiderne har ikke en 3'-hydroxylgruppe, hvorfor der ikke kan forekomme yderligere kædeforlængelse, når først dette dideoxynukleotid er på kæden. Dette kan føre til ophør af DNA'et rækkefølge.

Tilsvarende knytter ddNTP'er til dNTP'er? En eller flere af de dNTP'er er radioaktivt mærket for at hjælpe med at visualisere replikationsprodukterne. Til sidst får hvert rør et af fire specielle nukleotider kaldet dideoxynukleotider ( ddNTP'er ). Når DNA-polymerase først er inkorporeret, kan den imidlertid ikke forlænge kæden yderligere, fordi den har brug for en 3'-OH for at vedhæfte til næste nukleotid.

På samme måde kan man spørge, hvordan stopper ddNTP'er en sekventeringsreaktion?

Når det er til stede i små mængder i sekventeringsreaktioner , dideoxyribonukleosidtrifosfater ( ddNTP'er ) afslutte sekventeringsreaktion på forskellige positioner i de voksende DNA-strenge. ddNTP'er stopper en sekventeringsreaktion fordi de: får DNA-polymerase til at falde af skabelonstrengen. c.

Hvilken teknik, der involverer dideoxynukleotider, kunne bruges?

Sanger-sekventering er en metode af DNA-sekventering baseret på selektiv inkorporering af kædeterminerende dideoxynukleotider ved DNA-polymerase under in vitro DNA-replikation. Udviklet af Frederick Sanger og kolleger i 1977, var det den mest udbredte Brugt sekventering metode i cirka 40 år.

Anbefalede: